โปรบส์มาสเตอร์ qPCR

สำหรับใช้ในห้องปฏิบัติการทั่วไป การจัดส่ง: จัดส่งเป็นแพ็คเจล เงื่อนไขการจัดเก็บ: เก็บที่ -20 °C เพื่อหลีกเลี่ยงวงจรการแช่แข็ง/ละลาย การจัดเก็บที่ 4 °C นานถึง 3 เดือน อายุการเก็บรักษา: 12 เดือน รูปแบบ: ของเหลว ความเข้มข้น: 2x conc. คำอธิบาย: qPCR ProbesMaster ได้รับการออกแบบมาเพื่อการวิเคราะห์เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ของตัวอย่าง DNA โดยใช้การตรวจจับตามโพรบ DNA มาสเตอร์มิกซ์นี้แนะนำให้ใช้กับโพรบฟลูออเรสเซนต์แบบติดฉลากคู่ เช่น TaqMan®, Molecular Beacons หรือโพรบ FRET มาสเตอร์มิกซ์นี้เป็นเครื่องมือที่ใช้งานง่ายและทรงพลังสำหรับการวัดปริมาณ DNA ตัวอย่างในช่วงไดนามิกกว้างถึง 6 ลำดับความสำคัญด้วยความไวและความแม่นยำที่ยอดเยี่ยม ส่วนผสมนี้ประกอบด้วยรีเอเจนต์ทั้งหมดที่จำเป็นสำหรับ qPCR (ยกเว้นเทมเพลต ไพรเมอร์ และโพรบฟลูออเรสเซนต์ติดฉลาก) ในสารละลายพร้อมใช้งานเข้มข้น 2x ที่ผสมไว้ล่วงหน้า ความจำเพาะและความไวสูงของส่วนผสมนี้ขึ้นอยู่กับโพลิเมอเรสแบบฮอตสตาร์ทที่ปรับให้เหมาะสม กิจกรรมดังกล่าวจะถูกบล็อกโดยแอนติบอดีที่อุณหภูมิแวดล้อม และจะเปิดโดยอัตโนมัติเมื่อเริ่มมีการเปลี่ยนสภาพเบื้องต้น การกระตุ้นด้วยความร้อนจะป้องกันการขยายตัวของไพรเมอร์ที่ผ่านการอบอ่อนแบบไม่จำเพาะและการก่อตัวของไพรเมอร์-ไดเมอร์ที่อุณหภูมิต่ำในระหว่างการตั้งค่า PCR ส่วนผสมนี้สามารถใช้ร่วมกับสีย้อมอ้างอิง ROX (#PCR-351) ในเครื่องมือ PCR ที่เข้ากันได้กับการประเมินสัญญาณ ROX โพรบ DNA ที่มีฉลากคู่: เทคโนโลยี PCR แบบเรียลไทม์ที่ใช้โพรบ DNA ที่มีฉลากคู่ช่วยให้มีระบบ PCR ที่มีความไวสูงและจำเพาะสูงพร้อมความสามารถในการมัลติเพล็กซ์ โดยต้องใช้ไพรเมอร์ PCR มาตรฐานสองตัวและโพรบ DNA ที่ไฮบริดไซซ์กับส่วนภายในของแอมพลิคอน ลำดับของโพรบ DNA ที่ติดฉลากคู่ควรหลีกเลี่ยงโครงสร้างรองและการก่อตัวของไพรเมอร์ไดเมอร์ เนื้อหา: qPCR ProbesMaster (ฝาสีแดง) โพลีเมอเรสฮอตสตาร์ตที่ถูกบล็อกด้วยแอนติบอดี dATP, dCTP, dGTP, dTTP, KCl, (NH ₄ ) ₂ SO ₄ , MgCl ₂ , สารเติมแต่งและสารทำให้คงตัว น้ำเกรด PCR การเตรียมมาสเตอร์มิกซ์ qPCR: การเตรียมมาสเตอร์มิกซ์มีความสำคัญอย่างยิ่งในปฏิกิริยา PCR เชิงปริมาณเพื่อลดข้อผิดพลาดในการปิเปต เตรียมมาสเตอร์มิกซ์ของส่วนประกอบทั้งหมด ยกเว้นเทมเพลตตามที่กำหนด แนะนำให้ใช้ปริมาตรปฏิกิริยา 20-50 μl สำหรับเครื่องมือแบบเรียลไทม์ส่วนใหญ่ เตรียมมาสเตอร์มิกซ์ 13 ปริมาตรสำหรับตัวอย่าง 12 ตัวอย่างหรือชุดสามตัวอย่าง 4 ตัวอย่าง ปิเปตด้วยปลายกรองที่ปลอดเชื้อและลดการสัมผัสแสงของโพรบ DNA ที่ติดฉลากให้น้อยที่สุด ดำเนินการตั้งค่าในพื้นที่ที่แยกจากการเตรียมหรือวิเคราะห์ DNA ควรมีการควบคุมแบบไม่มีเทมเพลตในแอมพลิฟายเออร์ทั้งหมด

¹⁾ ความเข้มข้นที่เหมาะสมของไพรเมอร์แต่ละชนิดอาจแตกต่างกันไปตั้งแต่ 100 ถึง 500 nM ²⁾ ผลลัพธ์ที่เหมาะสมอาจต้องใช้การไทเทรตความเข้มข้นของโพรบ DNA ระหว่าง 50 ถึง 800 nM  การจ่ายส่วนผสมหลัก: ปั่นส่วนผสมหลักให้เข้ากันอย่างทั่วถึงเพื่อให้แน่ใจว่าเป็นเนื้อเดียวกัน แล้วจ่ายส่วนผสมลงในหลอด PCR แบบเรียลไทม์หรือหลุมของแผ่น PCR การเติมดีเอ็นเอแม่แบบ: เติมดีเอ็นเอตัวอย่าง/แม่แบบที่เหลือ x μl ลงในภาชนะปฏิกิริยาแต่ละใบที่มีส่วนผสมหลัก แล้วปิดหรือปิดผนึกหลอด/แผ่น อย่าให้ดีเอ็นเอเกิน 500 นาโนกรัมต่อปฏิกิริยาหนึ่งปฏิกิริยาเป็นความเข้มข้นสุดท้าย ควรปั่นหลอดหรือแผ่นก่อนทำรอบเพื่อกำจัดฟองอากาศที่อาจเกิดขึ้น สภาวะการปั่นจักรยานที่แนะนำ:

⁴⁾ อุณหภูมิการอบอ่อนขึ้นอยู่กับอุณหภูมิการหลอมเหลวของไพรเมอร์และโพรบดีเอ็นเอที่ใช้ ⁵⁾ เวลาการยืดออกขึ้นอยู่กับความยาวของแอมพลิคอน แนะนำให้ใช้เวลา 1 นาทีสำหรับชิ้นส่วนที่มีขนาดไม่เกิน 500 bp   เพื่อความจำเพาะและการขยายที่เหมาะสมที่สุด อาจจำเป็นต้องปรับแต่งพารามิเตอร์ที่แนะนำโดยเฉพาะอุณหภูมิการอบให้เหมาะสมสำหรับแต่ละชุดใหม่ของเทมเพลต DNA คู่ไพรเมอร์ และโพรบ DNA สินค้าที่เกี่ยวข้อง:

• โพรบ DNA ที่มีฉลากคู่
• ไพรเมอร์ที่กำหนดเอง
• สีอ้างอิง ROX, #PCR-351

การอ้างอิงผลิตภัณฑ์ BIOZ: