โพสต์ในบล็อก
การทำความเข้าใจความแตกต่าง: PCR แบบเรียลไทม์กับ RT-PCR
การทำความเข้าใจความแตกต่าง: PCR แบบเรียลไทม์กับ RT-PCR
ในโพสต์ของวันนี้ เราจะเจาะลึกถึงความแตกต่างระหว่าง PCR แบบเรียลไทม์และ RT-PCR ซึ่งเป็นเทคนิคอณูชีววิทยาสองประการที่มักกล่าวถึงในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ การทำความเข้าใจสิ่งเหล่านี้จะทำให้คุณมีมุมมองที่ชัดเจนยิ่งขึ้นเกี่ยวกับวิธีการศึกษาและกำหนดปริมาณสารพันธุกรรม
ภาพรวมโดยย่อ: PCR แบบเรียลไทม์กับ RT-PCR
- PCR แบบเรียลไทม์: ตรวจสอบการขยาย DNA แบบเรียลไทม์โดยใช้การเรืองแสง
- RT-PCR (Reverse Transcription PCR): แปลง RNA ให้เป็น DNA เพื่อให้สามารถตรวจจับและหาปริมาณ RNA ได้
วัตถุประสงค์หลัก
- PCR แบบเรียลไทม์: วิธีการนี้จะเป็นประโยชน์เมื่อคุณต้องการสังเกตปฏิกิริยา PCR ที่เกิดขึ้น มันเป็นเรื่องของการเห็น DNA เติบโต และใช้สารเรืองแสงเพื่อติดตามการเติบโตนี้ การทำเช่นนี้จะทำให้คุณเข้าใจถึงปริมาณ DNA ดั้งเดิม
- RT-PCR: สำหรับผู้ที่ต้องการเจาะลึกการศึกษา RNA RT-PCR คือสิ่งที่คุณต้องทำ มันเปลี่ยน RNA ให้เป็น DNA เมื่อเสร็จแล้ว ก็สามารถศึกษาและเพิ่มจำนวน DNA ใหม่ได้
พวกเขาใช้อยู่ที่ไหน?
- การใช้งาน PCR แบบเรียลไทม์: ลองนึกถึงงานต่างๆ เช่น การตรวจสอบปริมาณไวรัสในตัวอย่าง หรือการพิจารณาว่ามีการเปลี่ยนแปลง DNA ที่เฉพาะเจาะจงหรือไม่ มีประโยชน์หลากหลาย โดยช่วยในการตรวจสอบการแสดงออกของยีน การนับ DNA และอื่นๆ
- RT-PCR: นี่คือชื่อเสียงของการศึกษาการแสดงออกของยีน นักวิทยาศาสตร์ใช้มันเพื่อค้นหาว่ายีนใดที่ทำงานอยู่หรือเงียบภายใต้เงื่อนไขบางประการ
มีอะไรอยู่ภายในปฏิกิริยา?
- ส่วนประกอบ PCR แบบเรียลไทม์: เรากำลังพูดถึงหน่วยการสร้าง DNA ไพรเมอร์ DNA ที่เป็นแนวทาง และสารเรืองแสงที่ทำให้ทุกสิ่งมองเห็นได้
- เครื่องมือ RT-PCR: ดาวเด่นที่นี่คือเอนไซม์ Reverse Transcriptase มันคือสิ่งที่เปลี่ยน RNA ให้เป็น DNA หลังจากสวิตช์วิเศษนี้ คุณสามารถเพิ่ม DNA ใหม่ได้เหมือนกับใน PCR ทั่วไป
คุณได้อะไรจากมัน?
- ผลลัพธ์ PCR แบบเรียลไทม์: ตัวเลขซึ่งมักเรียกว่าเกณฑ์รอบหรือ Ct จะปรากฏขึ้น ตัวเลขนี้เผยให้เห็นความลับว่า DNA เริ่มต้นการเดินทางมีจำนวนเท่าใด
- ผลลัพธ์ RT-PCR: หลังกระบวนการนี้ การทดสอบเจลจะแสดงแถบ ซึ่งเผยให้เห็นว่ามียีนที่เฉพาะเจาะจงหรือขาดยีนดังกล่าว
โดยสรุป ทั้ง PCR และ RT-PCR มีบทบาทสำคัญในชีววิทยาระดับโมเลกุล แต่ละวิธีมีการประยุกต์ใช้ ส่วนประกอบ และผลลัพธ์ที่แตกต่างกัน การเข้าใจความแตกต่างระหว่างเทคนิคเหล่านี้จะช่วยให้เข้าใจรายละเอียดปลีกย่อยของการศึกษาทางพันธุกรรมได้ดียิ่งขึ้น
